經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間、連續(xù)的傳代培養(yǎng)后，細(xì)胞系隨著代數(shù)的增加，細(xì)胞的基因型和表型都有可能發(fā)生改變。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群，除非細(xì)胞經(jīng)過(guò)了遺傳改造。2、倍增和代數(shù)有什么區(qū)別？倍增是培養(yǎng)物中細(xì)胞總數(shù)的翻倍，通常是指細(xì)胞指數(shù)或?qū)?shù)生長(zhǎng)期。代數(shù)是指細(xì)胞群從培養(yǎng)瓶中移出，傳代培養(yǎng)過(guò)程的次數(shù)，傳代培養(yǎng)的目的，是使細(xì)胞處于低密度以刺激其進(jìn)一步生長(zhǎng)。3、接收到的凍存細(xì)胞該如何處理？收到包裝箱后，立即將凍存細(xì)胞從干冰移入液氮中凍存。此過(guò)程盡量快，以避免升溫。不要將細(xì)胞儲(chǔ)存在-80℃，這樣會(huì)對(duì)細(xì)胞造成不可挽回的傷害。4、凍存的細(xì)胞該如何開(kāi)始培養(yǎng)？(1)將一管細(xì)胞從液氮罐中取出，注意保護(hù)手和眼睛。(2)將凍存管快速的放入37℃水浴中，輕輕握住并旋轉(zhuǎn)，直到管內(nèi)物體完全融化。(3)將凍存管立即從水浴中拿出，擦干，轉(zhuǎn)入無(wú)菌環(huán)境。(4)用70％的酒精沖洗凍存管，然后擦去多余酒精。(5)打開(kāi)蓋子，注意手指不要碰到里面的螺紋（注意，由于凍存管有負(fù)壓，開(kāi)蓋時(shí)可能會(huì)有少量溢出，這是正常現(xiàn)象）。(6)用多聚賴氨酸（或參照說(shuō)明書）包被培養(yǎng)瓶。多數(shù)細(xì)胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個(gè)細(xì)胞。。細(xì)胞操作都需嚴(yán)格按照無(wú)菌操作進(jìn)行。上海組織原代細(xì)胞構(gòu)建

換液時(shí)間隔一般較短。原代細(xì)胞培養(yǎng)問(wèn)題解答1、原代細(xì)胞與細(xì)胞系有什么區(qū)別？根據(jù)傳統(tǒng)定義，自組織收獲和接種的細(xì)胞被稱為原代細(xì)胞[Freshney,.(1987)..(NewYork,.)].這類細(xì)胞直接從組織分離，生命周期有限，經(jīng)數(shù)次傳代后會(huì)逐漸停止生長(zhǎng)。原代細(xì)胞在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細(xì)胞的生長(zhǎng)空間，以保持細(xì)胞群中基因型和表型的一致性。細(xì)胞系是不斷生長(zhǎng)、分化的細(xì)胞群，因其經(jīng)過(guò)遺傳改造，致使其具有無(wú)限增長(zhǎng)的潛能。體外生長(zhǎng)的細(xì)胞系用于**或科研。但實(shí)際上，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間、連續(xù)的傳代培養(yǎng)后，細(xì)胞系隨著代數(shù)的增加，細(xì)胞的基因型和表型都有可能發(fā)生改變。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群，除非細(xì)胞經(jīng)過(guò)了遺傳改造。2、倍增和代數(shù)有什么區(qū)別？倍增是培養(yǎng)物中細(xì)胞總數(shù)的翻倍，通常是指細(xì)胞指數(shù)或?qū)?shù)生長(zhǎng)期。代數(shù)是指細(xì)胞群從培養(yǎng)瓶中移出，傳代培養(yǎng)過(guò)程的次數(shù)，傳代培養(yǎng)的目的，是使細(xì)胞處于低密度以刺激其進(jìn)一步生長(zhǎng)。3、接收到的凍存細(xì)胞該如何處理？收到包裝箱后，立即將凍存細(xì)胞從干冰移入液氮中凍存。此過(guò)程盡量快，以避免升溫。不要將細(xì)胞儲(chǔ)存在-80℃，這樣會(huì)對(duì)細(xì)胞造成不可挽回的傷害。上海血液原代細(xì)胞外包自我更新能力和多向分化能力是干細(xì)胞的兩個(gè)基本特征。

⑦實(shí)驗(yàn)完畢及時(shí)收拾，保持工作區(qū)域清潔整齊，用75%酒精清潔臺(tái)面。（3）細(xì)胞污染的預(yù)防①實(shí)驗(yàn)用品防止污染。細(xì)胞培養(yǎng)所用試劑、耗材、器材的清洗、消毒要徹底，各種溶液滅菌要仔細(xì)，并在無(wú)菌實(shí)驗(yàn)檢測(cè)陰性后才能使用。操作室及剩余的無(wú)菌器材要定期清潔、消毒、滅菌。②操作過(guò)程防止污染。③穿著容易起靜電或吸附灰塵的衣物必須更換為白大褂后才能進(jìn)入細(xì)胞間。④實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前需要確定戴的手套沒(méi)有問(wèn)題，只要接觸過(guò)生物**柜之外的物品，必須及時(shí)對(duì)手套進(jìn)行消毒。⑤進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)間后關(guān)好門，坐下來(lái)盡量少走動(dòng)以免影響生物**柜的風(fēng)簾。工作開(kāi)始前要先用75%酒精棉球擦手和瓶蓋。事先要嚴(yán)格檢查所用的器材、溶液和細(xì)胞，不要把污染品或未經(jīng)消毒的物品帶入無(wú)菌室內(nèi)，更不能隨便使用，以免造成大規(guī)模污染。⑥細(xì)胞操作時(shí)動(dòng)作要輕，必須在火焰周圍無(wú)菌區(qū)內(nèi)打開(kāi)瓶口，并將瓶口放在火焰周圍簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)動(dòng)燒灼，注意不要讓火焰把塑料瓶口燒化。⑦實(shí)驗(yàn)操作時(shí)生物**柜的隔板要盡可能放低，盡量減少談話，打噴嚏或咳嗽時(shí)不能對(duì)著工作區(qū)，以免造成不必要的污染。⑧瓶蓋應(yīng)當(dāng)?shù)狗旁谶h(yuǎn)離自己的地方，以避免瓶蓋被誤操作所污染。⑨不要從敞開(kāi)的容器口上方經(jīng)過(guò)。

在短時(shí)間內(nèi)即可大量擴(kuò)增，并產(chǎn)生殺死細(xì)胞。的種類繁多，肉眼可見(jiàn)，漂浮于培養(yǎng)液面上，可呈絲狀、管狀或樹(shù)枝狀等。2.合適的溫度一般哺乳類與禽類細(xì)胞在體外培養(yǎng)的適宜溫度是37～38℃，不適宜的環(huán)境溫度會(huì)影響細(xì)胞的生長(zhǎng)。細(xì)胞對(duì)低溫的耐受能力要強(qiáng)于對(duì)高溫的耐受能力，在低溫下，細(xì)胞的代謝活力及核**能力降低。若溫度不低于0℃，雖然細(xì)胞代謝受到影響，但無(wú)損傷作用；25～35℃時(shí)，細(xì)胞以緩慢的速度生長(zhǎng)；但若被置于40℃數(shù)小時(shí)，則不不利于細(xì)胞生存、生長(zhǎng)，甚至可導(dǎo)致其死亡。3.適宜的滲透壓高滲溶液或低滲溶液會(huì)引起細(xì)胞發(fā)生褶皺、腫脹、破裂。因此，滲透壓是體外培養(yǎng)細(xì)胞的重要條件之一。多數(shù)體外培養(yǎng)的細(xì)胞對(duì)滲透壓都有一定的耐受能力，實(shí)際應(yīng)用中，260～320mmol/L的滲透壓可適用于大多數(shù)細(xì)胞。4．氣體環(huán)境與pH細(xì)胞的體外培養(yǎng)需要理想的氣體環(huán)境，氧氣、二氧化碳是細(xì)胞生存的必要條件。氧氣參與細(xì)胞的三羧酸循環(huán)，為細(xì)胞生存、代謝與合成提供能量；二氧化碳既是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物，是細(xì)胞生長(zhǎng)的必需成分，又與維持培養(yǎng)液的pH有關(guān)。大多數(shù)細(xì)胞適宜的pH范圍往往是～。在開(kāi)放式培養(yǎng)中，以5%的二氧化碳?xì)怏w比例為宜。人臍動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞，Human Umbilical Artery Endothelial Cells。

易操作原代細(xì)胞和細(xì)胞系的比較3.原代細(xì)胞的應(yīng)用由于原代細(xì)胞生物學(xué)特性未發(fā)生很大改變，接近和反映體內(nèi)生長(zhǎng)特性，因此是：(1)研究生物體細(xì)胞的生長(zhǎng)、代謝、繁殖提供有力的工具；(2)更好實(shí)現(xiàn)醫(yī)診治模式，實(shí)現(xiàn)個(gè)體化用藥的目的。第二部分：原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)技術(shù)原代培養(yǎng)的原理將動(dòng)物機(jī)體的各種組織從機(jī)體中取出，經(jīng)各種酶(常用胰蛋白酶/膠原酶)、螯合劑(常用EDTA)或機(jī)械方法處理，分散成單細(xì)胞，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存、生長(zhǎng)和繁殖，這一過(guò)程稱原代培養(yǎng)。主要包括取材——分離——培養(yǎng)等3部分；在原代細(xì)胞應(yīng)用較多的包括：組織（如實(shí)體瘤、皮膚等）、懸浮細(xì)胞的取材等。下面依次介紹：一、組織的取材病人自體的原代細(xì)胞由于更接近臨床患者標(biāo)本，可以更好實(shí)現(xiàn)**的診治模式，實(shí)現(xiàn)個(gè)體化用藥的目的。所以對(duì)病人自體細(xì)胞體外分離與培養(yǎng)十分必要。基本過(guò)程如下圖所示：原代細(xì)胞的分離步驟備注：上圖細(xì)胞為肉瘤患者的原代細(xì)胞具體步驟如下：1.在無(wú)菌條件下的冰上對(duì)新鮮離體的組織，剔除包膜及壞死組織，無(wú)菌PBS清洗3-5次；切成約1mm3組織塊；2.加入2mmol的EDTA，搖勻后放置冰上約30-60min；3.離心，并加入膠原酶消化（含蛋白酶）；4.消化期間，置于37°培養(yǎng)箱。血管平滑肌細(xì)胞的異常增加的生長(zhǎng)潛力在血管疾病發(fā)生過(guò)程中起決定作用。上海兔原代細(xì)胞構(gòu)建

SD大鼠主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞，Rat Aortic vascular smooth muscle cells 貨號(hào)：PC-R-18302。上海組織原代細(xì)胞構(gòu)建

作為本實(shí)用新型所述的一種可以分離的細(xì)胞培養(yǎng)板的一方案，其中：所述底座底部固定安裝有支撐腳架。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實(shí)用新型的有益效果是：通過(guò)該一種可以分離的細(xì)胞培養(yǎng)板的設(shè)置，結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)合理，通過(guò)底座、一號(hào)培養(yǎng)板、梯形卡槽、二號(hào)培養(yǎng)板、梯形卡塊和固定螺絲的配合，實(shí)現(xiàn)了方便拆卸，且連接更加穩(wěn)定，通過(guò)橫向標(biāo)尺和縱向標(biāo)尺的配合，方便標(biāo)號(hào)對(duì)比，提高了效率。附圖說(shuō)明為了更清楚地說(shuō)明本實(shí)用新型實(shí)施方式的技術(shù)方案，下面將結(jié)合附圖和詳細(xì)實(shí)施方式對(duì)本實(shí)用新型進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，顯而易見(jiàn)地，下面描述中的附圖是本實(shí)用新型的一些實(shí)施方式，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)性的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其它的附圖。其中：圖1為本實(shí)用新型結(jié)構(gòu)示意圖；圖2為本實(shí)用新型側(cè)視結(jié)構(gòu)示意圖；圖3為本實(shí)用新型培養(yǎng)皿槽結(jié)構(gòu)示意圖。圖中；100底座、110支撐腳架、200一號(hào)培養(yǎng)板、210梯形凹槽、220固定螺絲、300二哈培養(yǎng)板、310梯形卡塊、400培養(yǎng)皿槽、410限位槽、420限位彈簧、430固定桿、500縱向標(biāo)尺、510橫向標(biāo)尺。具體實(shí)施方式為使本實(shí)用新型的上述目的、特征和優(yōu)點(diǎn)能夠更加明顯易懂，下面結(jié)合附圖對(duì)本實(shí)用新型的具體實(shí)施方式做詳細(xì)的說(shuō)明。上海組織原代細(xì)胞構(gòu)建